1)样品提供：

A.RNA样品 B.组织样品 C.血液样品 D.细胞样品

2)服务费用：

a) 一个样品检测(相对定量)多个miRNA的报价：

b)miRNA**定量检测：
   需要定制化学合成的miRNA标准品（MQP-0412）

3) 服务流程：
a. 请提供需检测miRNA(准确信息)发送至销售经理；
b. 签订《miRNA qRT-PCR检测服务合同》，并签字(或盖章)，传真回公司服务部；
c. 支付预付款，并传真汇款凭证回公司服务部；
d. 客户寄送样品至公司服务部；
e. 服务正式启动。

4)服务周期：

预计22个工作日，具体依实验而定。

利用多项**技术，提供不同类型 miRNA qPCR 专业检测服务。
       miRNA表达分析是生物功能研究的基础，是当今生物学研究的热点领域。准确检测细胞或实验动物组织中miRNA的表达可用来帮助研究者更快地切入miRNA的功能研究;在病理组织或血液中的miRNA表 达谱检测有助于分析miRNA与**的相关性，为开发miRNA作为**诊断及**生物标志物，和miRNA为基础的**开发奠定基础。我们经过不断的探索与努力，完成了针对miRBase数据库中全部人、小鼠、大鼠miRNA的 Bulge-Loop™ miRNA qPCR Primer Set，通过对细胞、组织或血液中的miRNA进行表达检测，得到了非常可靠的结果，现向您提供*上等miRNA实时荧光定量PCR全套技术服务。

1 Bulge-Loop™ miRNA qPCR技术服务项目：

a) 相对定量：以U6 snRNA或5S rRNA为内参，检测样本中相关miRNA的表达量；

b) **定量：以化学合成的miRNA成熟链(MQP-0412)为标准品，做5个梯度点以上的稀释后制作定量标准曲线，通过标准曲线对待检测miRNA进行**定量；

c) miRNA芯片数据确认：对芯片所筛选目的miRNA进行qRT-PCR数据验证。

2 Bulge-Loop™ miRNA qPCR技术服务方法及仪器：

用SYBR Green I荧光定量PCR试剂检测；

检测仪器为Bio-Rad CFX96，ABI7300等。

3 Bulge-Loop™ miRNA qPCR技术服务流程：

a) 样品RNA准备

提供样品总RNA，也可提供组织、血液、细胞类样品，但需支付￥60/样品 前期处理费用。

b) RNA质量检测

紫外吸收测定法测定波长260nm和280nm的吸收值，判断RNA样品的浓度，并结合琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。

c) 逆转录合成cDNA

利用茎凸环引物逆转录合成cDNA链。

d) 实时荧光定量PCR

以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增(每个样品检测三次，同时检测每个样品中U6 snRNA或5S rRNA含量作为内参，以校正上样误差)。

e) 分析结果、提供实验报告

相对定量—分析相对表达参数，提供统计学分析，获得相对表达差异；

**定量—依据miRNA标准品制作标准曲线(每条曲线上至少设置5个数据点)，以定量样品中的待检测miRNA；

分析实时定量PCR结果，提供实时定量PCR实验数据和扩增曲线，融解曲线，柱状图。

图1 Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR检测的扩增曲线

图2 Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR检测的融解曲线

图3 Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR分析5个样品中hsa-miR-122的表达差异